Vzorek nanesete do uzavřené kazety, extrakci nukleových kyselin i amplifikaci udělá přístroj sám. Výsledek řeknete majiteli během návštěvy, ne za dva nebo tři dny.
Nous30V je automatický real-time qPCR analyzátor. Čtyři fluorescenční kanály (FAM, HEX, ROX, Cy5) dovolí v jedné kazetě zachytit až čtyři cíle naráz, takže jedna kazeta pokryje celý klinický syndrom, ne jen jeden patogen. Dva nezávislé sloty znamenají dva vzorky současně, každý klidně s jiným panelem, dohromady až osm cílů v jednom spuštění.
Zabere 0,04 m³, váží 16 kg a vejde se na běžný pracovní stůl. Kazetu přístroj rozpozná sám podle QR kódu, test se nevybírá z menu.
Plná krev EDTA, výtěry (orofaryngeální, nazofaryngeální, oční, anální), ascites, pleurální výpotek, mozkomíšní mok, trus, moč, sérum, sputum a po homogenizaci i tkáně.
Vstupní objem 50 až 600 µl, u krve 100 µl.
Extrakce běží na magnetických kuličkách, ne přes membránové filtry. Ty se u trusu nebo hemolyzované krve zanášejí buněčným detritem. Magnetické kuličky tenhle problém nemají, takže si přístroj poradí i s PCR inhibitory ve výkalech.
Představení přístroje a platformy.
Příprava kazety: kontrola reagencií, sestavení a naplnění vzorkem.
Testování: načtení QR kódu, zasunutí dvou kazet do slotů P1 a P2 a spuštění testu.
Komentář a popisky ve videích jsou zatím pouze anglicky.
Příprava reagencií 40 sekund, nanesení vzorku 5 sekund, nastavení přístroje 15 sekund a pak už jen 40 minut automatické analýzy. Postup je pro všechny panely stejný, liší se jen první krok, tedy samotný odběr.
Celá reakce probíhá v uzavřené kazetě zapečetěné minerálním olejem. Míchání je bezkontaktní, rotujícími magnety, takže se nepipetuje a nic se neotevírá.
Komora má UV-C sterilizaci a membránovou filtraci vzduchu. Volná DNA se v ambulanci nešíří, a na PCR proto není potřeba samostatná místnost.
Na trhu jsou i levnější přístroje, které pracují izotermickou amplifikací, tedy při jedné stálé teplotě kolem 60 °C. Reakce běží bez teplotních cyklů, primery nasedají méně specificky a výsledek je náchylnější na falešnou pozitivitu i negativitu.
Nous30V je klasická real-time PCR. V každém cyklu se střídají tři teploty — denaturace DNA při zhruba 95 °C, nasednutí primerů kolem 55 až 60 °C a syntéza při 72 °C — a fluorescence se měří po každém cyklu. Je to tatáž metoda, jakou používají referenční laboratoře.
| Izotermická amplifikace | Real-time PCR (Nous30V) | |
|---|---|---|
| Princip | Jedna stálá teplota kolem 60 °C | Tři teploty v každém cyklu, měření po každém cyklu |
| Specificita | Primery nasedají méně specificky | Odliší i blízce příbuzné patogeny |
| Multiplex | Omezený | Čtyři cíle v kazetě, osm v jednom spuštění |
| Kvantifikace | Nelze | Ct hodnota ukáže míru nálože |
| Genetické testy | Zpravidla nejsou v nabídce | PKD a HCM u koček |
Těžiště nabídky je syndromové: respirační a průjmové panely, anémie, vektorové a klíšťaty přenášené nákazy, vstupní vyšetření při přijetí do chovu či útulku a zoonózy. K tomu jednotlivé patogeny a genetika koček. Mimo psy a kočky jsou panely pro koně, ptáky a prasata.
| Kat. č. | Panel a co detekuje | Parametrů |
|---|
V balení jsou čtyři testy. Reagencie jsou v kazetě lyofilizované, skladují se při 2 až 30 °C a vydrží 12 měsíců. Chladničku ani mrazničku není potřeba, kazetu vyjmete z krabice a rovnou použijete.
Kazeta detekuje genotyp PKD1 a obsahuje interní kontrolu. Prevalence u perských koček se uvádí 40 až 48 %, u ostatních plemen 9 až 14 %. Riziková jsou i plemena Exotic Shorthair a British Shorthair.
Jedna kazeta rozliší naráz tři genotypy: MyBPC3-A31P (Maine Coon, prevalence 34 až 41 %), MyBPC3-R820W (Ragdoll, 27,4 %) a ALMS1 (Sphynx), opět s interní kontrolou.
Oboje z EDTA krve, u HCM lze použít i stěr z líce. Výsledek během návštěvy.
Přístroj je schválený Ústavem státní kontroly veterinárních biopreparátů a léčiv, prošel procesem uvádění veterinární technické pomůcky na trh podle § 16 zákona č. 17/2018 Z. z. K dispozici je kompletní dokumentace pro slovenský i evropský trh.
Přístroj vám přivezeme, zapojíme a otestujeme na něm na místě předem domluvený počet a druh testů. Pokud je třeba delší testování, lze domluvit zapůjčení až na týden. Stačí domluvit termín.
