Vzorku nanesiete do uzavretej kazety, extrakciu nukleových kyselín aj amplifikáciu urobí prístroj sám. Výsledok poviete majiteľovi počas návštevy, nie o dva alebo tri dni.
Nous30V je automatický real-time qPCR analyzátor. Štyri fluorescenčné kanály (FAM, HEX, ROX, Cy5) dovolia v jednej kazete zachytiť až štyri ciele naraz, takže jedna kazeta pokryje celý klinický syndróm, nie len jeden patogén. Dva nezávislé sloty znamenajú dve vzorky súčasne, každá pokojne s iným panelom, dokopy až osem cieľov v jednom spustení.
Zaberie 0,04 m³, váži 16 kg a zmestí sa na bežný pracovný stôl. Kazetu prístroj rozpozná sám podľa QR kódu, test sa nevyberá z menu.
Plná krv EDTA, stery (orofaryngeálne, nazofaryngeálne, očné, análne), ascites, pleurálny výpotok, mozgovomiechový mok, trus, moč, sérum, spútum a po homogenizácii aj tkanivá.
Vstupný objem 50 až 600 µl, pri krvi 100 µl.
Extrakcia beží na magnetických guľôčkach, nie cez membránové filtre. Tie sa pri truse alebo hemolyzovanej krvi zanášajú bunkovým detritom. Magnetické guľôčky tento problém nemajú, takže si prístroj poradí aj s PCR inhibítormi vo výkaloch.
Predstavenie prístroja a platformy.
Príprava kazety: kontrola reagencií, zostavenie a naplnenie vzorkou.
Testovanie: načítanie QR kódu, zasunutie dvoch kaziet do slotov P1 a P2 a spustenie testu.
Komentár a popisky vo videách sú zatiaľ iba v angličtine.
Príprava reagencií 40 sekúnd, nanesenie vzorky 5 sekúnd, nastavenie prístroja 15 sekúnd a potom už len 40 minút automatickej analýzy. Postup je pre všetky panely rovnaký, líši sa len prvý krok, teda samotný odber.
Celá reakcia prebieha v uzavretej kazete zapečatenej minerálnym olejom. Miešanie je bezkontaktné, rotujúcimi magnetmi, takže sa nepipetuje a nič sa neotvára.
Komora má UV-C sterilizáciu a membránovú filtráciu vzduchu. Voľná DNA sa v ambulancii nešíri, a na PCR preto nie je potrebná samostatná miestnosť.
Na trhu sú aj lacnejšie prístroje, ktoré pracujú izotermickou amplifikáciou, teda pri jednej stálej teplote okolo 60 °C. Reakcia beží bez teplotných cyklov, priméry nasadajú menej špecificky a výsledok je náchylnejší na falošnú pozitivitu aj negativitu.
Nous30V je klasická real-time PCR. V každom cykle sa striedajú tri teploty — denaturácia DNA pri zhruba 95 °C, nasadnutie primérov okolo 55 až 60 °C a syntéza pri 72 °C — a fluorescencia sa meria po každom cykle. Je to tá istá metóda, akú používajú referenčné laboratóriá.
| Izotermická amplifikácia | Real-time PCR (Nous30V) | |
|---|---|---|
| Princíp | Jedna stála teplota okolo 60 °C | Tri teploty v každom cykle, meranie po každom cykle |
| Špecificita | Priméry nasadajú menej špecificky | Odlíši aj blízko príbuzné patogény |
| Multiplex | Obmedzený | Štyri ciele v kazete, osem v jednom spustení |
| Kvantifikácia | Nie je možná | Ct hodnota ukáže mieru nálože |
| Genetické testy | Spravidla nie sú v ponuke | PKD a HCM u mačiek |
Ťažisko ponuky je syndrómové: respiračné a hnačkové panely, anémia, vektorové a kliešťami prenášané nákazy, vstupné vyšetrenie pri prijatí do chovu či útulku a zoonózy. K tomu jednotlivé patogény a genetika mačiek. Okrem psov a mačiek sú panely pre kone, vtáky a ošípané.
| Kat. č. | Panel a čo deteguje | Parametrov |
|---|
V balení sú štyri testy. Reagencie sú v kazete lyofilizované, skladujú sa pri 2 až 30 °C a vydržia 12 mesiacov. Chladnička ani mraznička nie je potrebná, kazetu vyberiete z krabice a rovno použijete.
Kazeta deteguje genotyp PKD1 a obsahuje internú kontrolu. Prevalencia u perzských mačiek sa uvádza 40 až 48 %, u ostatných plemien 9 až 14 %. Rizikové sú aj plemená Exotic Shorthair a British Shorthair.
Jedna kazeta rozlíši naraz tri genotypy: MyBPC3-A31P (Maine Coon, prevalencia 34 až 41 %), MyBPC3-R820W (Ragdoll, 27,4 %) a ALMS1 (Sphynx), opäť s internou kontrolou.
Oboje z EDTA krvi, pri HCM možno použiť aj ster z líca. Výsledok počas návštevy.
Prístroj je schválený Ústavom štátnej kontroly veterinárnych biopreparátov a liečiv, prešiel procesom uvádzania veterinárnej technickej pomôcky na trh podľa § 16 zákona č. 17/2018 Z. z. K dispozícii je kompletná dokumentácia pre slovenský aj európsky trh.
Prístroj vám privezieme, zapojíme a otestujeme na ňom na mieste vopred dohodnutý počet a druh testov. Ak je potrebné dlhšie testovanie, dá sa dohodnúť zapožičanie až na týždeň. Stačí dohodnúť termín.
